常用的比色法有兩種:目視比色法和光電比色法,前者用眼睛觀察,后者用光電比色計(jì)測(cè)量。
目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法,采用一組由質(zhì)料*相同的玻璃制成的直徑相等、體積相同的比色管,按順序加入不同量的待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)溶液,再分別加入等量的顯色劑及其他輔助試劑,然后稀釋至一定體積,使之成為顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。再取一定量的待測(cè)組分溶液于一支比色管中,用同樣方法顯色,再稀釋至相同體積,將此樣品顯色溶液與標(biāo)準(zhǔn)色階的各比色管進(jìn)行比較,找出顏色深度zui接近于樣品顯色溶液的那支標(biāo)準(zhǔn)比色管,如果樣品溶液的顏色介于兩支相鄰標(biāo)準(zhǔn)比色管顏色之間,則樣品溶液濃度應(yīng)為兩標(biāo)準(zhǔn)比色管溶液濃度的平均值。標(biāo)準(zhǔn)系列法的主要優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單和操作簡(jiǎn)便,但眼睛觀察存在主觀誤差,準(zhǔn)確度較低。
光電比色法是在光電比色計(jì)上測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,將吸光度對(duì)濃度作圖,繪制工作曲線,然后根據(jù)待測(cè)組分溶液的吸光度在工作曲線上查得其濃度或含量。光電比色計(jì)通常由光源(鎢燈)、濾光片、吸收池、接收器(光電池或光電管)、檢流計(jì)五部分組成(見圖)。光路結(jié)構(gòu)上有單光電池式和雙光電池式兩種:?jiǎn)喂怆姵厥絻x器的測(cè)量結(jié)果受光源強(qiáng)度變化影響較大,而雙光電池式儀器則避免了這種影響。
與目視比色法相比,光電比色法消除了主觀誤差,提高了測(cè)量準(zhǔn)確度,而且可以通過選擇濾光片和參比溶液來消除干擾,從而提高了選擇性。光電比色計(jì)和紫外-可見分光光度計(jì)的光路結(jié)構(gòu)非常相似,它們之間所不同的地方在于:①分光光度計(jì)采用棱鏡或光柵作色散元件,因而可以得到純度較高的單色光束。而光電比色計(jì)采用濾光片,只能得到一定波長(zhǎng)范圍的光譜帶(復(fù)合光);②紫外-可見分光光度計(jì)采用紫外和可見區(qū)的光源,即氫燈和鎢燈,而光電比色計(jì)只用一種鎢燈光源,因而前者適用于紫外-可見光譜區(qū),而后者只適用于可見光譜區(qū);③紫外-可見分光光度計(jì)可以測(cè)定待測(cè)組分的精細(xì)吸收光譜,不僅可用于定量分析,而且可以作有機(jī)化合物的定性和結(jié)構(gòu)分析,而光電比色計(jì)只能作定量分析。此外,分光光度計(jì)一般都采用靈敏度高的光電倍增管作檢測(cè)器,而光電比色計(jì)一般用光電池或光電管作檢測(cè)器。因此,光電比色計(jì)無(wú)論在測(cè)量的準(zhǔn)確度、靈敏度和應(yīng)用范圍上都不如紫外-可見分光光度計(jì)。